本文来自Chem-Station日文版  逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR; reverse transcription PCR）  webmaster

翻译投稿 桂圆 校对 HaoHu

RT-PCR是一种针对RNA而非DNA的PCR方法。 使用逆转录酶（reverse transcriptase）将RNA样品转录为互补DNA的（cDNA），并将获得的cDNA进行普通PCR处理。所以说，除了逆转录步骤外，它与普通PCR技术是相同的。 有一种在一步中进行逆转录反应和PCR的方法，以及一种在两步中进行的方法。

它通常与qPCR结合使用，以进行RNA定量，例如基因表达平（mRNA水平）测量和RNA病毒感染测试（RT-qPCR）。 除了用于定量的目的之外，它也可用于克隆和测序。

逆转录PCR的流程

• 减少人工和工作错误。
• 由于工作步骤少，在有许多样品的情况下特别有利。
• 灵敏度可能会降低。
• 仅可使用靶向特定序列的引物。

RT-PCR的步骤

• 在逆转录反应和PCR过程中可以使用不同的引物。
• 易于调整每个步骤的条件。
• 比单步骤方法多了更多步骤，所以更容易发生污染和错误。

特别地，在两步骤法中，通常使用通过在逆转录反应中使用具有随机序列的引物文库来制备cDNA文库并且在PCR过程中通过使用特异性引物来扩增特异性基因的方法。 在某些情况下，也会使用具有poly T序列（与mRNA的poly A序列结合）的引物。

相关链接

• 聚合酶链反应（PCR）：化学报道
• 定量PCR（qPCR），实时PCR：化学报道

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