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逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)

本文来自Chem-Station日文版  逆転写ポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR; reverse transcription PCR)  webmaster

翻译投稿 桂圆 校对 HaoHu

RT-PCR是一种针对RNA而非DNA的PCR方法。 使用逆转录酶(reverse transcriptase)将RNA样品转录为互补DNA的(cDNA),并将获得的cDNA进行普通PCR处理。所以说,除了逆转录步骤外,它与普通PCR技术是相同的。 有一种在一步中进行逆转录反应和PCR的方法,以及一种在两步中进行的方法。

它通常与qPCR结合使用,以进行RNA定量,例如基因表达平(mRNA水平)测量和RNA病毒感染测试(RT-qPCR)。 除了用于定量的目的之外,它也可用于克隆和测序。

逆转录PCR的流程

  • 减少人工和工作错误。
  • 由于工作步骤少,在有许多样品的情况下特别有利。
  • 灵敏度可能会降低。
  • 仅可使用靶向特定序列的引物。

RT-PCR的步骤

  • 在逆转录反应和PCR过程中可以使用不同的引物。
  • 易于调整每个步骤的条件。
  • 比单步骤方法多了更多步骤,所以更容易发生污染和错误。

特别地,在两步骤法中,通常使用通过在逆转录反应中使用具有随机序列的引物文库来制备cDNA文库并且在PCR过程中通过使用特异性引物来扩增特异性基因的方法。 在某些情况下,也会使用具有poly T序列(与mRNA的poly A序列结合)的引物。

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