译自Chem-Station网站日本版 原文链接：タンパク質の定量法―ビシンコニン酸法 Protein Quantification – Bicinconic Acid Assay

翻译：炸鸡

原理

Bicinconic酸（BCA）法（Bicinconic Acid  Assay）是在Lowry法的基础上进行改良的比色法，用来测定蛋白质的浓度。

相较于Lowry法用的Folin-Ciocalteu试剂，Bicinconic酸法添加了Bicinconic酸（BCA）。Cu²⁺经蛋白质还原生成的Cu⁺与BCA形成的红紫色的配合物。测量配合物在562nm处的吸光度，然后用校准曲线定量。

优点

• 测定范围在001-2 mg/mL，灵敏度很好
• 大范围内呈线性变化
• 操作简单
• 相较于Lowry法，更不容易受到表面活性剂的影响

缺点

• 会受到螯合剂和硫醇还原剂的影响

步骤

BCA检测试剂盒可从不同的公司买到，但试剂可以用以下配方制备。

BCA试剂调制法

A液

将2,2’-联喹啉-4,4’-二甲酸二钠（10 g）、Na₂CO₃（20 g）、酒石酸钠（1.6 g）、NaOH（4 g）、NaHCO₃（9.5 g）溶解于超纯水中，定容至1L。然后用10N NaOH水溶液将pH值调节至11.25左右。A液可在室温下保存数月。

B液

将Cu₂SO₄-5H₂O（4 g）溶解于超纯水中，定容至100mL。B液可在室温下保存数月。

步骤

1. 将A液和B液按体积比50꞉1的比例混合均匀（即用即配）
2. 向每100μL的样品加入1ml1中的混合溶液，高速搅拌
3. 37℃下静置30分钟
4. 测定在562nm下的吸光度
5. 以BSA为标准样品制备稀释组和校准曲线，据此计算浓度。

参考文献

1. ”総タンパク質の定量法”　鈴木祥夫、ぶんせき2018, 1, 2. [PDF]
2. “[6] Quantification of protein” Stoscheck, C. M.  Enzymol.1990, 182, 50. doi:10.1016/0076-6879(90)82008-P
3. “Measurement of protein using bicinchoninic acid” Smith, P. K. et al. Biochem. 1985, 150, 76. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7

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