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蛋白质定量——Biuret Test

译自Chem-Station网站日本版 原文链接:タンパク質の定量法―ビューレット法 Protein Quantification – Biuret Test

翻译:炸鸡

即古典比色法。

由三个以上氨基酸连接在一起的三肽或者寡肽・蛋白质在碱性条件下与Cu2+反应时,肽键会形成红紫色的Cu+络合物。肽键越多显的颜色越深。在540 nm波长下测定吸光度,再根据校准曲线算出含量。生成的络合物与双缩脲-铜络合物类似,故得名双缩脲试验。

此法改良后就是Lowry法和BCA法。

  • 难以受到蛋白质组成差异的影响
  • 操作简便
  • 难以受到界面活性剂・脂质的影响

  • 测定范围为1-10 mg/mL,灵敏度低
  • 显色会受到高浓度的三羟甲基氨基甲烷和铵离子的影响

Biuret试剂的制作方

将CuSO4・5H2O(3 g)、酒石酸钾钠(12 g)、超纯水(500 mL)混合在一起,边搅拌边加入10% NaOH(600 mL),碘化钾(4 g),加超纯水调至2L。调制好的试剂能在室温下保存数月。

操作方法

  1. 向蛋白质溶液样品(100 μL)中加入1 mL的Biuret试剂,用高速搅拌机搅拌
  2. 在室温下静置20到30分钟
  3. 测定540nm下的吸光度
  4. 以BSA为标准样品制备稀释样品和做出校准曲线,并在此基础上对浓度进行量化

  1. ”総タンパク質の定量法” 鈴木祥夫、ぶんせき2018, 1, 2. [PDF]
  2. “[6] Quantification of protein” Stoscheck, C. M.  Enzymol.1990, 182, 50. doi:10.1016/0076-6879(90)82008-P
  3. “A New Colorimetric Assay of Tabletop Sweeteners Using a Modified Biuret Reagent” Fenk, C. J.; Kaufman, N.; Gerbig, D. G. Jr.  Chem. Educ.2007, 84, 1676. doi:10.1021/ed084p1676

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