译自Chem-Station网站日本版 原文链接：タンパク質の定量法―紫外吸光法 Protein Quantification – UV Absorption

翻译：炸鸡

蛋白质中有能够吸收紫外光的氨基酸残基。尤其是酪氨酸・色氨酸侧链的吸收波长在280nm左右。缓冲溶液中很少有280nm附近的吸收峰，所以通过在280nm波长下测量吸光度（A280），依据Lambert-Beer法则就可以推算出蛋白质在缓冲溶液中的浓度了。当A₂₈₀ = 1.0 (l ＝1 cm)时，蛋白质的浓度约为1 mg/mL。

但是蛋白质的酪氨酸・色氨酸含量有差异，所以这个方法并不是十分严谨。优点是操作简单，可即时测定，样品能回收。

• 可回收样品并再次利用样品
• 操作简单且迅速

• 测定范围只有05-2 mg/mL，灵敏度较低
• 无法测量不含芳香族氨基酸的蛋白质（如胶原蛋白）
• 不同蛋白质吸光度不同
• 如果被有紫外吸收的物质污染，测量结果会受影响[2]

图片出自这里

• 需要注意的是核苷酸类在260～280 nm处有吸收。如果A₂₈₀/A₂₆₀＜1.5，很可能混入了核苷酸，需要用其他办法定量蛋白质。如果核苷酸含量较少就用下列校正公式计算蛋白质浓度[3]。

图片出自这里

• 紫外测定吸收用的样品槽是用石英制的。不能用塑料或玻璃。
• 使用Nanodrop的装置，可以测量1-2μL液体。
• 280nm处的摩尔吸收系数（ε₂₈₀）可以通过色氨酸-酪氨酸-半胱氨酸二聚体（胱氨酸）的含量计算出来，具体公式如下[4]。它也可以通过在这个网站上输入主序列来计算。

ϵ₂₈₀ [M-1cm-1]= nW x 5,500 + nY x 1,490 + nC x 125 （C = cystine）

1. ”総タンパク質の定量法”　鈴木祥夫、ぶんせき2018, 1, 2. [PDF]
2. “[6] Quantification of protein” Stoscheck, C. M. Methods Enzymol.1990, 182, 50. doi:1016/0076-6879(90)82008-P
3. ”Isolation and Crystallization of Enolase” Warburg, O.; Christian W.  Z.1942, 310, 384.
4. “How to measure and predict the molar absorption coefficient of a protein” Pace, C. N.; Vajdos, F.; Fee, L.; Grimsley, G.; Gray, T. Protein Sci.1995, 4, 2411. doi:1002/pro.5560041120

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